HPLC Conditions
Column: Zorbax Eclipse Plus C18, 4.6 x 150 mm x 5 µm
Column Temp: 40 °C
Mobile Phase A: 1 L water containing 238 mg KBr and 700 µL 4M HNO3
Mobile Phase B: MeOH
Isocratic: A: B = 50; 50, 12 min
Flow rate: 1.0 mL/min
Detection: Ex: 362 nm, Em: 455 nm, gain = 15
Injection: 20 µL
Electrochemical Current: 100 µA setting
Reaction coil: 0.5 mm id 34 cm long peek tubing (from exit of KOBRA cell to the entrance of FLD)
آماده‌سازی نمونه برای آنالیز HPLC آفلاتوکسین
25 گرم از نمونه را به اضافه‌ی 2 گرم NaCl و 125 میلی‌لیتر از متانول و آب مقطر گرید HPLC به صورت 60 به 40 با هم مخلوط کنید و آن را داخل یک بلندر با سرعت بالا بریزید. این ترکیب را برای یک دقیقه مخلوط کنید و عصاره‌ی آن را با 125 میلی‌لیتر آب مقطر رقیق کنید. بعد از فیلتراسیون، 10 میلی‌لیتر از محلول فیلتر‌شده را از ستون Immunoaffinity با فلوریت 2-3 میلی‌لیتر بر دقیقه عبور دهید. سپس ستون HPLC با 10 میلی‌لیتر آب شسته شود. نهایتا، آفلاتوکسین‌ها را از کارتریج با استفاده از یک میلی‌لیتر متانول گرید HPLC بشورید و اضافی متانول نیز با 1 میلی لیتر آب شسته شود، قبل از اینکه به HPLC تزریق شود.
پیشنهاد می‌شود برای آشنایی با فرایند کروماتوگرافی مایع، مقاله‌ی HPLC چیست؟ را در بلاگ صدراپژوهش مطالعه نمایید.
